La macchina completamente automatica per l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici di New Tech

Cinque punti di forza:
● Strumento configurato con la fase di estrazione dell'acido nucleico e purificazione
● Strumento configurato con modulo di estrazione ad ultrasuoni
● Strumento configurato con modalità completamente automatica
● Strumento configurato con amplificazione a temperatura variabile
● Strumento configurato con kit di reagenti completamente chiuso

1. I reagenti per il rilevamento degli acidi nucleici devono essere estratti e purificati?
Il principio del rilevamento dell'acido nucleico è il seguente: sotto l'azione del primer, la DNA polimerasi viene utilizzata per eseguire l'amplificazione della reazione a catena sul DNA/RNA modello (che richiede la trascrizione inversa di NA), quindi viene rilevata la quantità di segnale fluorescente rilasciato per determinare se il campione contiene l'acido nucleico (DNA/RNA) dell'agente patogeno da rilevare.

1) I campioni che non sono stati estratti o purificati possono contenere molti componenti che influenzano il risultato finale: nucleasi (che può dissolvere l'acido nucleico target e causare falsi negativi), proteasi (che può ridurre la DNA polimerasi e causare falsi negativi), metalli pesanti sale (che porta all'inattivazione della sintasi e causa falsi positivi), PH troppo acido o troppo alcalino (che può causare il fallimento della reazione), RNA incompleto (che porta a un fallimento della trascrizione inversa falso negativo).

2) Alcuni campioni sono difficili da amplificare direttamente: Gram-positivi e alcuni parassiti, a causa delle loro pareti cellulari spesse e di altre strutture, se non passano attraverso il processo di estrazione e purificazione dell'acido nucleico, il kit senza estrazione potrebbe fallire per tali campioni.

Pertanto, si consiglia di selezionare il kit del test o lo strumento configurato con la fase di estrazione dell'acido nucleico.

2. Estrazione chimica o estrazione fisica con frammentazione ad ultrasuoni?
In generale, l'estrazione chimica può essere applicata alla maggior parte del pretrattamento e della purificazione.Tuttavia, nei batteri Gram-positivi a parete spessa e in alcuni parassiti, accade anche che l'estrazione chimica non riesca a ottenere modelli di acido nucleico efficaci, con conseguente rilevamento di falsi negativi.Inoltre, l'estrazione chimica utilizza spesso agenti forti, se l'eluizione non è accurata, è facile introdurre alcali forti nel sistema di reazione, con conseguenti risultati imprecisi.

La frammentazione ad ultrasuoni utilizza la frantumazione fisica, che è stata utilizzata con successo da GeneXpert, un'azienda leader nel campo del POCT per uso umano, e presenta un vantaggio assoluto nell'estrazione dell'acido nucleico di alcuni campioni complessi (come Mycobacterium tuberculosis).

Pertanto, si consiglia di selezionare un kit di test o uno strumento configurato con una fase di estrazione dell'acido nucleico.ed è ottimale se è presente un modulo di estrazione ad ultrasuoni.

3. Manuale, semiautomatico e completamente automatico?
Questo è un problema di costo del lavoro e di efficienza del lavoro.Al momento, gli ospedali per animali domestici non dispongono di personale sufficiente e l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici è un lavoro che richiede determinate competenze ed esperienza.Non c'è dubbio che la macchina completamente automatica per l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici sia la scelta perfetta.

4. Amplificazione a temperatura costante o amplificazione a temperatura variabile?
La reazione di amplificazione è un collegamento per il rilevamento dell'acido nucleico e la tecnologia professionale coinvolta in questo collegamento è complessa.In parole povere, gli enzimi vengono utilizzati per amplificare l'acido nucleico.Nel processo di amplificazione viene rilevato il segnale di fluorescenza amplificato o il segnale di fluorescenza incorporato.In generale, quanto prima appare il segnale di fluorescenza, tanto maggiore è il contenuto del gene bersaglio nel campione.

L'amplificazione a temperatura costante è un'amplificazione dell'acido nucleico a temperatura fissa, mentre l'amplificazione a temperatura variabile è un'amplificazione ciclica strettamente basata sulla denaturazione-ricottura-estensione.È stato effettuato il tempo di amplificazione a temperatura costante, mentre il tempo di amplificazione a temperatura variabile è fortemente influenzato dalla velocità di aumento e diminuzione della temperatura dello strumento (al momento, molti produttori sono stati in grado di eseguire 40 cicli di amplificazione in circa 30 minuti).

Se le condizioni del laboratorio sono buone e la zonizzazione è rigorosa, è ragionevole affermare che la differenza di accuratezza tra i due non sarà grande.Tuttavia, l'amplificazione a temperatura variabile sintetizzerà più prodotti di acido nucleico in un tempo relativamente più breve.Per i laboratori senza una rigorosa zonizzazione e senza personale con formazione professionale, il rischio di perdita di aerosol di acido nucleico sarà maggiore, il falso positivo si verifica una volta avvenuta la perdita ed è estremamente difficile da eliminare.

Inoltre, l'amplificazione a temperatura costante è anche più incline all'amplificazione non specifica quando il campione è complesso (la temperatura di reazione relativa è inferiore e maggiore è la temperatura di estensione, migliore è la specificità di legame del primer).

Per quanto riguarda la tecnologia attuale, l'amplificazione a temperatura variabile è più affidabile.

5. Come evitare il rischio di fuoriuscita dei prodotti di amplificazione degli acidi nucleici?
Attualmente, molti produttori scelgono come tubo di reazione dell'acido nucleico il tubo per PCR del tipo con pressacavo, che è sigillato per attrito, e la denaturazione della temperatura nella denaturazione a temperatura variabile nell'amplificazione PCR a temperatura variabile raggiunge i 90 gradi
Centigradi.Il ripetuto processo di espansione con il calore e contrazione con il freddo rappresenta una grande sfida per la sigillatura della provetta PCR e la provetta PCR del tipo a pressacavo è relativamente facile da causare perdite.

È preferibile adottare la reazione con un kit/tubo completamente sigillato per evitare la fuoriuscita del prodotto di reazione.Sarebbe perfetto se fosse possibile elaborare un kit completamente sigillato per l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici.

Quindi la nuova macchina completamente automatica per l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici di New Tech ha le cinque scelte ottimali di cui sopra.